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流式抗體(熒光抗體)細(xì)胞染色步驟與注意

更新時(shí)間:2024-03-14  |  點(diǎn)擊率:829

染色緩沖液(BSA)的配制:
PBS含有1% FBS和0.09% NaN3,置于冰上或4度生化培養(yǎng)箱備用。
準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液:淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞。
用冰染色緩沖液洗細(xì)胞2次,離心細(xì)胞,用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞,使終濃度為2×107細(xì)胞/ml。
各取50ul(106細(xì)胞)細(xì)胞懸液到2個(gè)圓底的Ep管中。
根據(jù)抗體說明書在其中1個(gè)Ep管中加入合適的抗體量,另外1個(gè)加入同型對(duì)照抗體,冰上避光孵育20分鐘(建議每5分鐘輕輕混勻,以免細(xì)胞沉積)。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。
用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合的抗體,300×g離心5分鐘,每次離心后小心吸取上清。
用適量染色緩沖液(如500ul)重懸細(xì)胞。
流式細(xì)胞儀分析染色結(jié)果(不超過4小時(shí))。如果暫時(shí)無法檢測(cè),也可以將染色后的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定后,避光儲(chǔ)存在4度。固定后的細(xì)胞可以保存至多一個(gè)星期。

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